數(shù)字PCR快速定量移植受體中的供體DNA

背景：來自移植受者循環(huán)中移植物的無細(xì)胞DNA（cfDNA）是排斥反應(yīng)的潛在生物標(biāo)志物。通過使用微陣列和供體和受體DNA的大規(guī)模平行測(cè)序，在維持階段的心臟移植后研究了其有用性。這些方法的缺點(diǎn)是成本高，周轉(zhuǎn)時(shí)間長，需要供體DNA。因此，我們尋求使用數(shù)字微滴PCR（ddPCR）開發(fā)快速且經(jīng)濟(jì)有效的方法。

方法：從肝(LTx，n=10)、腎(KTx，n=9)和心臟(HTx，n=8)移植后的穩(wěn)定受者和7例LTx后直接入院的患者采集血漿。已知的單核苷酸多態(tài)性具有較高的等位基因頻率，共建立了41種水解探針分析方法。血漿cfDNA預(yù)擴(kuò)增，然后用傳統(tǒng)的實(shí)時(shí)熒光PCR方法確定信息(異源)SNP，然后用ddPCR對(duì)嫁接衍生cfDNA(GcfDNA)進(jìn)行定量(百分比)。

結(jié)果：平均回收率為94%(SD，13%)，不精密度為4%~14%。緩解組GcfDNA分別為＜6.8%(LTx)、＜2.5%(KTx)和＜3.4%(HTx)。在LTx當(dāng)天，GcfDNA大約為90%，到第10天，無并發(fā)癥LTX接受者的GcfDNA為＜15%。在2例經(jīng)活檢證實(shí)的排斥反應(yīng)患者中，GcfDNA升高到60%，而在1例膽汁淤積癥患者中未發(fā)現(xiàn)GcfDNA升高。

結(jié)論：開發(fā)了一種新的、經(jīng)濟(jì)有效的、快速的技術(shù)來定量移植受者的GcfDNA。這項(xiàng)技術(shù)體現(xiàn)了一種有希望的、潛在的通用生物標(biāo)記物，用于早期檢測(cè)排斥反應(yīng)，這可能使更有效的治療干預(yù)成為可能。